超低温保存对真鲷（Pagrus major）精子质量的影响

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	超低温保存对真鲷（Pagrus major）精子质量的影响
	陈亚坤
学位类型	硕士
导师	李军
	2010-05-01
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	水产养殖
关键词	真鲷精子超低温保存受精率抗氧化酶活性遗传物质稳定性
摘要	一般认为，在超低温条件下精子处于休眠状态，代谢活动基本停止，长时间保存对精子的质量没有显著影响。然而随着超低温保存技术的广泛应用和精子质量检测方法的发展和完善，有文献报道，在液氮超低温条件下保存的精子质量发生了变化。本论文以冷冻精子库中保存1个月到84个月的真鲷（Pagrus major）精子为研究对象，通过对冷冻精子寿命、运动率、受精率、孵化率和超微结构的观察、对冷冻精子超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、乳酸脱氢酶(LDH)、琥珀酸脱氢酶(SDH)等酶活性的测定、以及对冷冻精子核DNA损伤的检测，系统研究了冷冻保存对精子的结构、生理功能、生化组成和遗传物质等特征的影响，从不同层面揭示精子在超低温保存过程中的结构及功能变化规律，以期阐明长期冷冻保存对鱼类精子质量的影响及影响机理。主要研究结果如下：1．测定液氮保存2，12，25，37，60，84个月的真鲷精子的运动率、受精率和孵化率，结果表明，冷冻精子的运动率、受精率、孵化率随保存时间的延长显著下降(P<0．05)。保存2个月的精子运动率、受精率和孵化率最高，分别为85．00％±4：2．00％，79．01%±12．86％，71．61％±3．26％；保存12，25，37个月的精子运动率、受精率和孵化率与保存2个月的精子差异不显著；保存60个月的精子运动率(68．00%±2．00％)、受精率(32．90％±5．29％)和孵化率(36．03％±8．59％)显著低于保存2，12，25，37个月的精子(P<0．05)；保存84个月的精子运动率、受精率和孵化率最低，分别为45．00%±2．00％，16．74％±3．00％，11．22％±2．71％。2．在液氮中保存1，13，26，48，73个月的真鲷精子，解冻激活后，其持续运动时间随保存时间的延长而降低，持续运动时间分别为180s，180s，150s，140s，100s；冷冻精子在4℃的存活寿命分别为120h，38h，38h，28h，20h。另外，保存1，13，26个月的精子加入海水后立即激活达到最高运动率，而保存48和73个月的精子加入海水后开始的10-20s约只有10％的精子运动，随后运动精子陆续增多，经过50-60s才达到最高运动率。3．真鲷冻精超微结构观察结果表明，正常精子呈近似圆球形，直径为1-3-1．4μm，包括头部，中段和尾部三部分结构，其中头部和中段紧密相接，冷冻精子损伤主要表现为精子头部损伤，线粒体损伤以及精子质膜、核膜的损伤，其中膜损伤为主要损伤，损伤精子中80％-90％带有膜损伤。4．对液氮中保存1，13，26，48，73个月的真鲷精子解冻后进行酶活性测定，结果表明，保存1和13个月的精子SOD活性差异不显著，保存48和73个月的精子SOD活性显著低于保存1和13个月的精子(P<0．05)，保存26个月和保存1，13，48，73个月的精子之间SOD活性无显著差异；保存1个月的精子CAT活性最高，显著高于保存13，26，48，73个月的精子(P<0．05)，保存13，26，48，73个月的精子之间CAT活性无显著差异；保存13个月的精子LDH活性最高(1817．22±431．41 u／mgprot)，显著高于其他组精子(P<0．05)；保存73个月的精子SDH活性最高(31．90±2．87 u／mgprot)，保存1个月的精子SDH活性最低(18．83±1．34 u／mgprot)。5．对液氮中冷冻保存11，23，36，58，83个月的真鲷精子进行单细胞凝胶电泳实验，结果表明，冻精彗星率为34．00％±4．00％～42．67％±9．45％，鲜精彗星率为30．67％±6．43％，各组冻精和鲜精之间彗星率差异不显著，即保存11-83个月的冻精和鲜精之间遗传物质稳定性差异不显著(P>0．05)。本研究表明，超低温保存对精子质量存在显著的影响，长期冷冻保存主要影响精子的寿命、运动率、受精率、孵化率、抗氧化酶活性等参数，上述参数都随保存时间延长呈下降趋势。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17697
专题	海洋生物技术研发中心
推荐引用方式 GB/T 7714	陈亚坤. 超低温保存对真鲷（Pagrus major）精子质量的影响[D]. 中国科学院研究生院,2010.