玻璃海鞘多肽的分离纯化及抗肿瘤机制研究

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	玻璃海鞘多肽的分离纯化及抗肿瘤机制研究
	程林友
学位类型	博士
导师	林秀坤
	2011-05-19
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位专业	海洋药物学
关键词	玻璃海鞘分离纯化多肽抗肿瘤凋亡机理
摘要	恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病，目前的抗肿瘤药物虽然具有一定疗效，但存在选择性差、毒副作用大等缺点，药物治疗期待着新的突破。因此，寻找高效低毒的抗肿瘤药物已经成为当前肿瘤研究的重要内容。传统抗肿瘤天然药物的来源局限在陆地，近年来在海洋来源的具有抗肿瘤活性物质的开发上取得了很多成果，获得了多种高活性、毒副作用小、作用机制新颖的活性化合物，为新型抗肿瘤药物的研发提供了新思路。作为一种海洋动物，海鞘在海洋抗肿瘤药物领域有着重要的研究价值，到目前为止已经从海鞘中发现了很多具有生物活性---尤其是抗肿瘤活性的物质。在本研究中，我们从海鞘中分离纯化得到了一种具有抗肿瘤活性的多肽类化合物，并且对其抗肿瘤作用机理进行了较为深入的研究。本研究利用70%丙酮沉淀、超滤截留、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换、Superdex75凝胶层析和C18 反相柱层析等分离手段，采用活性追踪的方法，由玻璃海鞘（Ciona intestinalis L.）中分离纯化出一种能诱导肿瘤细胞凋亡的多肽PCI5931，质谱分析确定其分子量为5931道尔顿。利用蛋白质测序仪测定其N-末端氨基酸序列为Met-Val-Val-Pro-Pro-Asp-Gly-Gln-Ser-Glu-Cys-Pro-Asp-Gly- Asn。MTT检测表明其对多种肿瘤细胞具有强烈的细胞毒作用，并呈剂量依赖关系，但是对正常肝细胞BEL-7702活性很低。为进一步研究PCI5931的作用方式，我们分别从形态学研究、吖啶橙/溴化乙锭染色、DAPI染色、细胞周期阻滞、线粒体膜电位变化和信号传导途径等方面开展了相关研究。结果发现PCI5931能够诱导BEL-7402肿瘤细胞凋亡，可使肿瘤细胞周期阻滞在G2/S期、线粒体膜电位下降、凋亡小体产生等一系列事件，结合western bloting的结果我们初步推断PCI5931诱导BEL-7402肿瘤细胞凋亡通过线粒体途径。由玻璃海鞘中发现新的抗肿瘤多肽国内外的报道较少，我们的工作表明玻璃海鞘可作为抗肿瘤化合物的重要来源，由于玻璃海鞘活性多肽PCI5931对多种肿瘤细胞具有很高的细胞毒活性，而对正常细胞毒性又很低，作为一种候选的抗肿瘤药物具有很大优点，有希望成为一类新型抗肿瘤药物。我们对PCI5931的抗肿瘤作用机制进行了较为深入的研究，初步阐明了它抗肿瘤作用的分子机理为线粒体凋亡途径。但是，关于PCI5931诱导肿瘤细胞凋亡的精确机制还不清楚，该多肽与信号分子之间的相互作用需要进一步研究来确定。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/17757
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	程林友. 玻璃海鞘多肽的分离纯化及抗肿瘤机制研究[D]. 中国科学院研究生院,2011.

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玻璃海鞘多肽的分离纯化及抗肿瘤机制研究-（2005KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览