肿大细胞虹彩病毒与宿主蛋白的相互作用及免疫防控研究

IOCAS-IR > 实验海洋生物学重点实验室

	肿大细胞虹彩病毒与宿主蛋白的相互作用及免疫防控研究
	张健
学位类型	博士
导师	孙黎
	2014-05
学位授予单位	中国科学院研究生院
学位授予地点	北京
学位专业	海洋生物学
关键词	肿大细胞虹彩病毒免疫应答免疫防控 Dna疫苗
其他摘要	鱼类肿大细胞虹彩病毒（Megalocytivirus），属虹彩病毒科（Iridoviridae），是一种大型的20面体双链DNA病毒。近年来在亚洲东部、东南部及欧洲部分地区，由该病毒引起的鱼类疾病呈现逐年增加的趋势，给水产养殖业造成了重大的损失。2012年本实验室分离、鉴定了一株肿大细胞虹彩病毒，命名为RBIV-C1，并对其进行了全基因组的测序分析。在实验条件下该病毒对鲆鲽类（如牙鲆和大菱鲆）的感染率可达100%，且对大菱鲆的致死率高达100%。因此，RBIV-C1是一种对鲆鲽鱼类具有重大危害的潜在病原。本研究中，我们通过腹腔注射的方式对大菱鲆和牙鲆进行RBIV-C1感染，并通过荧光定量PCR检测感染后病毒在鱼体内的增殖情况。结果显示：大菱鲆体内病毒的拷贝数随着感染时间的增加而逐渐增高，并从第9天开始出现死亡现象，12天内死亡率可达100%；牙鲆体内的病毒拷贝数也随着时间的增加而逐渐增高，但是总体病毒拷贝数显著低于大菱鲆体内，且11天以后病毒拷贝数开始下降。我们分别对感染RBIV-C1后的大菱鲆和牙鲆脾脏进行了蛋白组学分析。在大菱鲆的中我们共发现了43个差异表达的蛋白点，并成功鉴定出了其中35个蛋白；在牙鲆中我们共发现了65个差异表达的蛋白点，并成功鉴定出了其中50个蛋白。通过体内过量表达的方法，我们对大菱鲆的3个上调表达蛋白（Hsp70、Mx1和NKEF）的抗病毒能力和佐剂能力进行了研究。结果表明， NKEF具有显著的抑制肿大细胞虹彩病毒在体内增殖的能力，而Hsp70则具有显著的免疫佐剂效应。在肿大细胞虹彩病毒的免疫防控研究方面，我们以大菱鲆为模型，针对RBIV-C1基因组序列中的25个基因构建了DNA疫苗。疫苗免疫大菱鲆一个月后，用致死剂量的RBIV-C1对受免鱼进行攻毒。结果显示，与对照组相比，三个疫苗（pCN444、pCN523和pCN247）表现出了较高的保护效力，其相对免疫保护率（RPS）达到60%以上。免疫学分析表明：pCN444、pCN523和pCN247均可以上调先天和获得性免疫相关基因的表达以及诱导特异性的细胞免疫和体液免疫应答。除此之外，pCN444诱导的血清抗体还具有中和病毒的能力。这些结果说明，pCN444、pCN523和pCN247是有效的DNA疫苗，有望在养殖业中被用来控制肿大细胞虹彩病毒的暴发。
语种	中文
文献类型	学位论文
条目标识符	http://ir.qdio.ac.cn/handle/337002/18109
专题	实验海洋生物学重点实验室
推荐引用方式 GB/T 7714	张健. 肿大细胞虹彩病毒与宿主蛋白的相互作用及免疫防控研究[D]. 北京. 中国科学院研究生院,2014.

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肿大细胞虹彩病毒与宿主蛋白的相互作用及免（4842KB）			限制开放	CC BY-NC-SA	浏览